蘋果酸脫氫酶(MDH)普遍存在于動(dòng)物,植物,細(xì)菌等各種生物體中,是生物糖代謝的關(guān)鍵酶之一,能催化蘋果酸與草酰乙酸之間的可逆轉(zhuǎn)換。MDHs在細(xì)胞的多種生理活動(dòng)中起著重要的作用,包括線粒體的能量代謝以及植物的活性氧代謝等。
蘋果酸脫氫酶的生化特性
最適pH值和最適溫度
MDHs的最適pH值偏堿性,約在8.0左右,如鏈霉菌和大腸桿菌的MDH(EcMDH)都在pH值8.1的時(shí)候酶活性最高。MDHs的最適反應(yīng)溫度為40~65℃。如枯草桿菌MDH和豬心肌MDH的最適溫度約50℃,嗜熱脂肪芽孢桿菌(BMDH)在65℃有較好的穩(wěn)定性。在溫度趨向兩極的情況下,大多數(shù)種屬的MDHs活力不高,但來(lái)自嗜寒細(xì)菌的MDH(AaMDH)在4℃左右仍然保持較高的活性,嗜熱細(xì)菌的MDH在90℃仍然可以保持1h左右的活力,這種差異可能是由于活性位點(diǎn)某種殘基的偏愛(ài)、底物和輔因子電荷的分布以及亞基間離子對(duì)的相互作用等原因造成的。
熱穩(wěn)定性
EcMDH和枯草桿菌MDH的熱穩(wěn)定性較差。嗜熱脂肪芽孢桿菌BsMDH在高溫下相當(dāng)穩(wěn)定。嗜寒細(xì)菌AaMDH不耐熱,推測(cè)與氫鍵數(shù)目、脯氨酸或甘氨酶分子的數(shù)量、位置、及它們的相互作用有關(guān)。在低溫環(huán)境下,甘油是維持MDHs活性的最好穩(wěn)定劑,而環(huán)多醇和山梨醇能在高溫下維持MDHs的活性。這種穩(wěn)定原理可能是羥基基團(tuán)和酶分子的相互作用或是醇類減少了介質(zhì)的介電常數(shù)而加強(qiáng)了酶分子的疏水作用,使酶蛋受水分子的影響減少。
金屬離子的影響
帶各種電荷的離子對(duì)MDHs的活性及蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響不同,通過(guò)不同金屬離子對(duì)綠豆MDH的研究表明∶K+有激活作用;Mg2+和Ca2+對(duì)酶活影響不大;Zn2+、P2+和Cu2+對(duì)酶活有不同程度的抑制作用,其中Cu2+抑制程度最強(qiáng),當(dāng)其濃度為1M時(shí),97%的酶活被抑制。
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