化學(xué)發(fā)光底物吖啶酯可以直接標記蛋白、抗體、核酸等，不同的吖啶酯其標記方法也有差異，大致的標記方法類型將在本文作簡介。

按照標記物的應(yīng)用可以分為化學(xué)標記和生物標記；標記的對象可以是小分子物質(zhì)，如甾體激素、藥物等，也可以是大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、抗體、抗原、核酸以及某些配基、和載體；標記的過程可以是直接偶聯(lián)(如碳二亞胺縮合）或間接偶聯(lián)（如琥珀酰亞胺活化）。

吖啶酯發(fā)光底物

碳二亞胺（EDC）縮合法：

此法可用于蛋白質(zhì)分子中游離羧基或氨基的標記，常用縮合劑有EDC、DCC等。5 號為吖啶酯NSP-SA為含羧酸基團的吖啶酰胺，需要加入縮合劑 EDCI 等，才能與含胺基的蛋白發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。

重氮鹽偶聯(lián)法（重氮化）：

此法簡易、成本低、重復(fù)性好，但不適用于脂肪伯氨基發(fā)光劑，因其生產(chǎn)的重氮鹽不穩(wěn)定，且異魯米諾衍生物ABEI等伯伯胺基位于側(cè)鏈的也不適用。

琥珀酸酐法（環(huán)內(nèi)酸酐法）：

此法沒有雙功能交聯(lián)劑的不良反應(yīng)，能實現(xiàn)標記物和蛋白質(zhì)分子間的單向定量縮合，標記效率高，商品化試劑供應(yīng)成熟。我們含有NHS活化基團的吖啶酯（ 1～4 號）都屬于這一類，能與抗體、蛋白的胺基進行偶聯(lián)，直接標記。

還有異魯米諾常用的異硫氰酸酯衍生物法，以及過碘酸鹽氧化法、戊二醛法、O-（羧甲基）羥胺法、混合酸酐法，但由于或多或少的使用限制，不去前幾種廣泛。

一般來說魯米諾等酶促化學(xué)發(fā)光底物通常不直接標記，魯米諾氨基發(fā)生取代后發(fā)光性能受到顯著影響（異魯米諾則可以改善），所以通常采用催化的酶（如HRP、POD、GOD）和/或協(xié)同因子（如ATP、輔酶NAD等）來標記抗體或抗原。但是吖啶酯的優(yōu)勢是可以連接帶有能夠標記的基團，可直接標記抗體或核酸，發(fā)光性能幾乎無影響。

綜上所述，德晟的六種吖啶酯除了抗水解性、親水性的不同外，其標記方法也是有差異的，大家可以根據(jù)標記的蛋白、抗體類型作選擇。