Tris-HCl緩沖液用于蛋白純化中需注意什么？

近期，很多實驗室會在蛋白純化過程中使用生物緩沖液，此時挑選適合的緩沖劑就顯得格外重要。很多人會特別挑選Tris一類的，認(rèn)為離子強(qiáng)度低，緩沖能力強(qiáng)，其PH值接近生理范圍，是蛋白的良好溶劑。但其實Tris-HCl緩沖液也可以用于蛋白純化，只不過為了保證純化效果，在實驗過程中還是需要注意一些問題。

一、注意Tris-HCl的濃度

在純化實驗中確定了緩沖液的pH值和Tris-HCl的緩沖體系，就能知曉它設(shè)定的PH緩沖作用，通常情況下緩沖劑解離常數(shù)pKa在設(shè)定pH值上下一個單位內(nèi)具有緩沖作用。僅僅只有緩沖范圍和解離常數(shù)復(fù)合遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，另外還需確保緩沖液Tris-HCl的濃度足夠高，才能起到實際效果，一般濃度為20-100mM。

二、注意Tris-HCl對溫度的敏感度

Tris系列的緩沖體系對溫度都比較敏感，比如在25℃時將Tris-HCl調(diào)至pH為8，pH值將在5℃時增加到8.58，而在37℃時降到7.71。因此在4℃條件下保存蛋白或在37℃進(jìn)行實驗，就應(yīng)該考慮到室溫下調(diào)的pH值可能在實驗條件中是否適用。

三、注意Tris-HCl緩沖液中的鹽

蛋白純化實驗中用Tris-HCl緩沖液，需要添加氯化鈉以提高鹽濃度，以協(xié)助維持蛋白的可溶性和模擬生理條件，一般常用濃度150mM。離子交換層析進(jìn)行蛋白純化開始時，需降低鹽濃度減少競爭，凝膠過濾柱和Ni2+親和層析柱則需提高濃度。緩沖液體系對蛋白的活性不會有干擾，Tris-HCl中不能含有磷酸鹽，否則就會抑制某些蛋白的活性，反應(yīng)前會徹底透析掉。

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