酶聯(lián)免疫分析是體外診斷技術(shù)中使用普遍且應(yīng)用時(shí)間比較久的一種分析檢測(cè)技術(shù)，其用到的設(shè)備儀器簡(jiǎn)單，各種實(shí)驗(yàn)環(huán)境下都可以操作，靈敏度也比較高，具有多方面的優(yōu)勢(shì)。酶聯(lián)免疫所使用的底物除了大家熟知的ELISA中的TMB之外，還有新型Trinder’s試劑等。

色原底物

新型Trinder’s試劑是在傳統(tǒng)Trinder’s試劑的基礎(chǔ)上通過(guò)官能團(tuán)的取代優(yōu)化改進(jìn)而來(lái)，穩(wěn)定性和靈敏度更好。它的種類很多，目前德晟已經(jīng)研發(fā)并銷(xiāo)售的有9種，包括TOOS、TOPS、MAOS、ADPS等等。不同的Trinder’s試劑的氧化產(chǎn)物，其蕞大吸收光波長(zhǎng)和摩爾吸光系數(shù)不一樣，分別適用于不同生化指標(biāo)的檢測(cè)。

Trinder’s試劑檢測(cè)原理

Trinder’s試劑屬于HRP的氧化耦聯(lián)色原底物對(duì)，和4-氨基安替（4-AAP）比鄰耦聯(lián)氧化顯色（也可用2-甲基-2苯并噻唑啉酮腙MBTH，但應(yīng)用較少）。在H202存在下，4-氨基安替比林和新型Trinder’s試劑經(jīng)HRP作用縮合形成紅色的醌亞胺類物質(zhì)，其在特定波長(zhǎng)處有最大吸收，大于540nm，檢測(cè)波長(zhǎng)紫外區(qū)，干擾少。

色原底物TMB

TMB即四甲基聯(lián)苯胺，是ELISA試劑盒中所使用的酶聯(lián)免疫底物。它屬于一種氧化還原色原底物，其氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(zhǎng)450nm（吸收光為藍(lán)光）處有蕞大消光系數(shù)。當(dāng)酶HRP量少，過(guò)氧化氫溶液和TMB過(guò)量時(shí)，則形成藍(lán)色的陽(yáng)離子根，降低pH，即可使藍(lán)色的陽(yáng)離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌。硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min，1%SDS作為終止劑可使鮮藍(lán)色24h內(nèi)保持不變，但有較強(qiáng)的褪色作用。

新型Trinder’s試劑與TMB相比，成本更高一些，不如TMB適用廣泛，不過(guò)它們的吸收波長(zhǎng)要更高，更是達(dá)到了630nm。除了上述的色原底物之外，德晟還可以提供檢測(cè)中所需要的各種酶制劑。