什么時候應(yīng)該在細胞培養(yǎng)基中使用HEPES？

是一種常用的兩性離子緩沖液，在37°C下的pKa為7.3。在培養(yǎng)基中我們除了碳酸氫鈉外，還應(yīng)使用HEPES，因為重要的是要在培養(yǎng)基中保持足夠的碳酸氫鹽以達到營養(yǎng)目的。如果需要，HEPES可以以10mM至25mM的最終濃度添加到細胞培養(yǎng)基中，以提供額外的緩沖能力。較低的濃度通常不足以控制pH的波動，而較高的濃度通常是有毒的。

由于HEPES的緩沖能力與CO2濃度無關(guān)，因此當細胞培養(yǎng)需要在CO2之外進行長時間操作時，它是維持培養(yǎng)pH的理想緩沖液孵化器。HEPES緩沖介質(zhì)可抵抗急劇的pH急劇變化，但不能完全阻止pH的變化。由于高含量的HEPES會引起細胞毒性，因此如果對特定細胞系或原代細胞培養(yǎng)物有明顯毒性，則應(yīng)降低這種有機緩沖液的濃度。

為什么要使用HEPES？

由于培養(yǎng)中細胞的生長和代謝會導(dǎo)致培養(yǎng)基的環(huán)境pH值發(fā)生劇烈變化，因此，為了維持可以穩(wěn)定培養(yǎng)細胞的環(huán)境，有必要向其中添加適量的某些生物緩沖液。但是，市場上有如此多的生物緩沖液和替代品可用于細胞培養(yǎng)，為什么要使用HEPES？

通常，大多數(shù)細胞的zui佳培養(yǎng)環(huán)境是pH7.2-pH7.4，HEPES的緩沖范圍恰好在pH6.8-pH 8.2內(nèi)，這對于細胞培養(yǎng)是有利的。與其他緩沖液（例如PBS（磷酸鹽緩沖鹽水）和TRIS）相比，HEPES在維持細胞培養(yǎng)基的pH值方面具有更高的穩(wěn)定性。這也是HEPES廣泛用于細胞培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，蛋白質(zhì)純化和提取，免疫沉淀，細胞裂解，活細胞成像和其他生物/生化研究的原因。

使用HEPES的好處有哪些？

HEPES在低溫條件下作為酶的緩沖劑

通常的使用條件是室溫25攝氏度，或者更高的溫度（依據(jù)酶的最適pH范圍），但有時候需要在低溫條件下實驗，有些緩沖劑受低溫影響明顯不宜使用。HEPES分解能力可隨溫度的升高而增強，隨溫度的降低而減弱，但與其他緩沖劑相比，它的分解常數(shù)隨溫度變化不大，這使HEPES緩沖液成為在低溫時可較好地保持酶的結(jié)構(gòu)和功能的緩沖劑。

HEPES對細胞無毒副作用

HEPES緩沖劑能較長時間控制恒定的pH范圍，低濃度的HEPES對細胞無毒性作用，常用于細胞培養(yǎng)，比如各種細菌、真菌的培養(yǎng)液或病毒保存液中可以通過添加HEPES來維持細胞、細菌、病毒所需的pH環(huán)境。