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Tris及其衍生物的那些觸角延伸到了哪里?

發(fā)表時間:2020-10-15

Tris是一種應(yīng)用非常廣泛的有機試劑,它的有效緩沖范圍在pH7.09.2之間。它及其衍生物被廣泛應(yīng)用于生物化學和分子生物學實驗中的緩沖液的制備,可用于制作藥物、有機合成、生物緩沖劑等。其中在生化實驗中,許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實驗都需要用Tris作為生物緩沖劑。甚至有超過磷酸鹽緩沖液的趨勢,本文將對其衍生緩沖液進行簡述。 

TBS緩沖液
        TBSTris緩沖鹽水,是Tris-HCl緩沖鹽溶液,為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。因為Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;對生物化學過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。但是緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,溫度效應(yīng)也大,而且易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封,此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。
TBST緩沖液
        TBST中含有Tris-HCl,NaCl,tween20這三種物質(zhì),是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì),并且維持一個接近的天然環(huán)境。其中,Tween是一種離子表面活性劑,可加速抗體非特異性結(jié)合的分離。因為Western Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,孵育過程中,抗體能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高,在孵育抗體后,混有Tween 20TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的抗體洗掉,增加特異性。
TE緩沖液
        Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液,TE緩沖液是弱堿性,對DNA的堿基有保護性,因此,DNATE中的穩(wěn)定性較好,不易被破壞完整性或產(chǎn)生開環(huán)及斷裂,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。

 TAE緩沖液
        將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸,則獲得“TAE緩沖液Tris/Acetate/EDTA),TAE是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量,且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率也較快,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果。此外,回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。但是,TAE的缺點是緩沖容量小,除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換,否則長時間電泳是不可選用的。
TBE緩沖液
        丙烯酰胺實驗以及瓊脂糖凝膠電泳將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成硼酸則獲得“TBE緩沖液Tris/Borate/EDTA)。TBE Buffer是分子實驗中常用的緩沖液,由Tris和硼酸、EDTA組成,所以簡稱為TBE buffer。該緩沖液常用于聚電泳實驗中。TBE Buffer為無色澄清液體,可在室溫中儲存,25℃時的pH值為8.2~8.4。在使用時要注意的是TBE Buffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶的活性。


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