化學(xué)發(fā)光免疫CLIA分析誕生于1977年。根據(jù)放射免疫分析的基本原理，將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來(lái)，建立了化學(xué)發(fā)光免疫分析法。CLIA具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、操作簡(jiǎn)便、不需要十分昂貴的儀器設(shè)備等特點(diǎn)。CLIA應(yīng)用范圍較廣，既可檢測(cè)不同分子大小的抗原、半抗原和抗體，又可用于核酸探針的檢測(cè)。CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比，具有無(wú)輻射、標(biāo)記物有效期長(zhǎng)并可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。 

化學(xué)發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學(xué)發(fā)光分析兩個(gè)系統(tǒng)。免疫分析系統(tǒng)是將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)或酶作為標(biāo)記物，直接標(biāo)記在抗原或抗體上，經(jīng)過(guò)抗原與抗體反應(yīng)形成抗原一抗體免疫復(fù)合物。化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入氧化劑或酶的發(fā)光底物，化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化劑的氧化后，形成一個(gè)處于激發(fā)態(tài)的中間體，會(huì)發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定的基態(tài)，發(fā)光強(qiáng)度可以利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)物的含量。

化學(xué)發(fā)光免疫分析是用直接標(biāo)記抗體或抗原的一類免疫測(cè)定方法。目前常見(jiàn)的標(biāo)記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學(xué)發(fā)光劑。

1 魯米諾類標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析：魯米諾類物質(zhì)的發(fā)光為氧化反應(yīng)發(fā)光。在堿性溶液中，魯米諾可被許多氧化劑氧化發(fā)光，其中H2O2最為常用。因發(fā)光反應(yīng)速度較慢，需添加某些酶類或無(wú)機(jī)催化劑。酶類主要是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，無(wú)機(jī)類包括O3、鹵素及Fe3 、Cu2 、Co2 和它們的配合物。早期主要用于無(wú)機(jī)物和有機(jī)生物小分子的測(cè)定，靈敏度因標(biāo)記后發(fā)光強(qiáng)度降低而降低。人們發(fā)現(xiàn)發(fā)光體系中加入某些酚類及其衍生物、胺類及其衍生物和苯基硼酸衍生物對(duì)體系的發(fā)光均有顯著增強(qiáng)作用，發(fā)光強(qiáng)度可提高1000倍，并且“本底”發(fā)光顯著降低，發(fā)光時(shí)間也得到延長(zhǎng)。這些增強(qiáng)劑的使用，使化學(xué)發(fā)光免疫分析在蛋白、核酸分析領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。

2 吖啶酯類標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析：吖啶酯用于CLIA由于熱穩(wěn)定性不是很好，經(jīng)研究合成了更穩(wěn)定的吖啶酯衍生物。在H2o2和OH一條件下，吖啶酯類化合物能迅速發(fā)光，量子產(chǎn)率很高，如吖啶芳香酯的量子產(chǎn)率可達(dá)0.05，吖啶酯作為標(biāo)記物用于免疫分析，發(fā)光體系簡(jiǎn)單、快速，不需要加入催化劑，且標(biāo)記效率高，本底低。這些特點(diǎn)引起廣大分析診斷工作者的極大興趣。