魯米諾(luminol),又名發(fā)光氨,它常溫下是一種黃色晶體或者米黃色粉末,是一種比較穩(wěn)定的化學(xué)試劑。同時(shí),魯米諾又是一種強(qiáng)酸,對(duì)眼睛、皮膚、呼吸道有一定刺激作用。
它是一種最古老的和最常用的試劑,在堿性條件下可被過氧化物氧化,同時(shí)發(fā)光,魯米諾和過氧化物之間的氧化還原反應(yīng)需要催化劑,這種催化劑一般為多價(jià)金屬離子、過氧化物酶如鐵、辣根過氧化物酶等,此種方法常用于檢測(cè)過氧化物、重金屬、過氧化物酶的含量,以及由此衍生的檢測(cè)自由基、進(jìn)行毒物分析和基于過氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。
在通常情況下與過氧化氫在某些催化劑存在時(shí)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)非常迅速。最常用催化劑是金屬離子,在很大濃度范圍內(nèi),金屬離子濃度與發(fā)光強(qiáng)度成正比,從而可進(jìn)行某些金屬離子的化學(xué)發(fā)光分析,利用這一反應(yīng)可以分析那些含有金屬離子的有機(jī)化合物,達(dá)到很高的靈敏度。其次是利用有機(jī)化合物對(duì)魯米諾化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的抑制作用,測(cè)定對(duì)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)具有猝滅作用的有機(jī)化合物。其三是通過偶合反應(yīng)間接測(cè)定無機(jī)或有機(jī)化合物。
魯米諾發(fā)光原理
一是次氯酸鈉氧化魯米諾使其發(fā)光;
二是過氧化氫與次氯酸鈉反應(yīng)生成氧氣氧化魯米諾使其發(fā)光:
首先是次氯酸鈉和過氧化氫反應(yīng)的方程式:NaClO+ H2O2 == NaCl + O2 + H2O
其次,魯米諾與氫氧化物反應(yīng)時(shí)生成了一個(gè)雙負(fù)離子(Dianion),它可被過氧化氫分解出的氧氣氧化,產(chǎn)物為一個(gè)有機(jī)過氧化物。該過氧化物很不穩(wěn)定,立即分解出氮?dú)猓斆字Z被有機(jī)氧化劑如二甲基亞砜氧化后不是生成氮?dú)?,而是生成含氮有機(jī)物),生成激發(fā)態(tài)的3-氨基鄰苯二甲酸。激發(fā)態(tài)至基態(tài)轉(zhuǎn)化中,釋放的能量以光子的形式存在,波長(zhǎng)位于可見光的藍(lán)光部分。
魯米諾(發(fā)光氨)作為化學(xué)發(fā)光試劑常用于檢測(cè)之中,不過,有些人會(huì)問,魯米諾在應(yīng)用的時(shí)候一般會(huì)選擇哪些發(fā)光檢測(cè)的方法呢?德晟告訴你的3種方法,分別為催化劑加快發(fā)光,抑制劑間接測(cè)定,通過偶合間接測(cè)定。
催化劑加快發(fā)光方法估計(jì)都明白,魯米諾發(fā)光檢測(cè)發(fā)光速度太慢,所以在檢測(cè)中常要加入一些催化劑來加速。在化學(xué)發(fā)光免疫分析中我們會(huì)經(jīng)常用到的催化劑是過氧化物,特別是辣根過氧化物酶,而除了辣根酶,催化劑還包括一些金屬配合物、過渡金屬離子,比如血紅蛋白、鐵離子、錳離子等。
有加速就有抑制,有些有機(jī)物會(huì)抑制劑來抑制魯米諾的發(fā)光,如含有酚羥基團(tuán)的還原性化合物,那就可以利用這點(diǎn)對(duì)此類有機(jī)物進(jìn)行間接測(cè)定,這便是第二種測(cè)定方法。
通過偶合間接測(cè)定的方法是指將能夠產(chǎn)生或者消耗化學(xué)發(fā)光反應(yīng)物的一個(gè)反應(yīng)與另一個(gè)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)結(jié)合起來,從而可以實(shí)現(xiàn)某些物質(zhì)的間接化學(xué)發(fā)光測(cè)定。在測(cè)定某些底物酶的純度的時(shí)候會(huì)用到此方法。